藜CaMAPKK2的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选

• 作者: 兰海燕 吕秀云 姜生秀 李晓荣 贺转转 邢佳佳 陈莎莎
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 藜 盐胁迫 信号转导途径 MAPKK 酵母双杂交 定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 889-897
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.05.003

摘要

[目的]通过对抗逆植物藜的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径中MAPKK的胁迫表达模式分析及信号转导途径互作组分的筛选,探索植物藜响应外界胁迫信号诱发逆境耐受的机制.[方法]以藜叶片总RNA为模板,利用定量PCR方法对NaC1、H202和ABA胁迫下藜MAPKK表达规律进行了分析.利用RT-PCR结合RACE技术获得了藜MAPKK的全长cDNA序列.利用酵母双杂交技术对MAPKK盐胁迫信号通路互作组分进行了分析.[结果]获得一个藜MAPKK的全长cDNA序列,命名为CaMAPKK2,其开放阅读框为1 089 bp,编码一个由362个氨基酸组成的丝裂原活化蛋白激酶.定量PCR显示CaMAPKK2受盐胁迫诱导明显上调表达,同时受外源H202和ABA调控.H2O2合成抑制剂DPI与ABA合成抑制剂Na2WO4显著抑制了300mmol.L-1NaC1处理下CaMAPKK2的表达.以全长CaMAPKK2为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术筛选到5个可能与CaMAPKK2相互作用的蛋白.测序结果显示,其中1个序列可通读,该cDNA序列长794 bp,与欧洲赤杨(Alnus glutinosa)和拟南芥的噻唑合成酶(thiazole biosynthetic enzyme)基因AgTHI1和AtTHI1核酸序列相似度达79％和78％,其它4个序列没有连续的读码框.[结论]CaMAPKK2受NaCl和H2O2诱导上调表达,暗示盐胁迫可能通过诱导H2O2和ABA的积累从而导致CaMAPKK2表达增加.要进一步筛选CaMAPKK2互作组分需获得更多阳性克隆并开展相关功能验证试验.