兔Oct4启动子驱动RFP基因表达载体的构建及验证

• 作者: 周小梅 唐澜 姜伟华 尹明茹 李和平 李善刚 陈学进
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 兔 rOct4启动子 RFP 干细胞 转基因
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 18-25
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2014.01.0283

摘要

转录因子OCT4在维持和调控胚胎干细胞的多能性中发挥着重要的作用.Oct4基因启动子驱动标志蛋白的表达对研究胚胎干细胞多能性和建立iPS细胞有重要意义.由于GFP在慢病毒转染过程中常用作转染标记,计划构建兔Oct4基因启动子(rOct4)驱动红色荧光蛋白表达的载体,这将有利于兔ES细胞和iPS细胞制备的研究.通过PCR方法扩增rOct4,构建了rOct4驱动RFP基因的表达载体rOct4-RFP.经转染小鼠ES细胞验证正确后,将rOct4-RFP质粒转染兔成纤维细胞系获得rOct4-RFP成纤维细胞系.经过酶切和测序验证,证明rOct4-RFP构建成功,而且能够在小鼠ES细胞系E14中表达细胞红色荧光蛋白,并受细胞分化状态的调控.通过脂质体介导的基因转移、抗性筛选和PCR鉴定建立了rOct4-RFP转基因成纤维细胞系.