小鼠Derlin-1重组腺病毒的构建及在胰岛中的表达鉴定

• 作者: 刘佳 单伟 吴倜珺 汪彦阳 韩晓
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Derlin-1基因 重组腺病毒 糖尿病 胰岛β细胞
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 90-93
• 页数: 4页
• 分类号: R349.7
• 字数: 3575字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2014.01.006

摘要

目的 构建小鼠Derlin-1重组腺病毒载体,包装、纯化并检测病毒滴度,观察重组腺病毒在小鼠胰岛中的表达.方法 设计合成针对小鼠Derlin-1基因cds区的引物序列,采用PCR的方法以小鼠胰岛cDNA为模板,扩增目的基因Derlin-1,经Xba Ⅰ和HindⅢ双酶切后,克隆至AdTrack-CMV穿梭质粒上,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,通过脂质体将正确的重组体包裹并转染293A细胞,在其中包装扩增病毒.利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP,对病毒滴度和感染效率进行检测.最终得到pAd-Derlin-1重组腺病毒载体,体外转染小鼠胰岛,使用Western印迹法检测Derlin-1蛋白表达水平.结果 酶切鉴定证明Derlin-1基因重组腺病毒构建成功,病毒有较强感染能力.并验证其在小鼠胰岛中成功过表达.结论 应用同源重组方法成功构建了含小鼠Derlin-1基因的重组腺病毒.为进一步研究Derlin-1在胰岛β细胞中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩晓	南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室	38	125	7.0	10.0
2	刘佳	南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室	84	425	10.0	16.0
3	吴倜珺	南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室	2	0	0.0	0.0
4	单伟	南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室	2	2	1.0	1.0
5	汪彦阳	南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室	2	3	1.0	1.0