猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量RT—PCR检测方法的建立

• 作者: 于美芳 刘爽 刘自立 吴发兴 张志 李晓成 王树双 董雅琴 邵卫星
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 TaqMan探针 荧光定量RT—PCR
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 76-79,84
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 字数: 2923字
• 语种: 中文

摘要

本为快速特异地检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),根据猪流行性腹泻病毒N基因序列设计合成引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT—PCR检测PEDV的方法.用阳性质粒10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,结果显示,该方法的标准曲线的相关系数为0.99,检测敏感性达到26.1拷贝/μ L,且具有很好的特异性和重复性,对猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测结果均为阴性,批内和批间变异系数均小于2.5％.对43份现地病料的检测结果也表明该方法(检出28份)比常规RT—PCR方法(检出12份)敏感性更高,为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段.