TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用

• 作者: 冉多良 刘邓 徐丽华 牛登元 王一成 王朝文 袁秀芳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 28-34
• 分类号: S858.282.659.6|Q7
• 字数: 4286字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2010.01.005

摘要

根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒N基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段.以克隆N基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan 荧光定量PCR方法.该方法在108～101 copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10copies/μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2%,表明此方法具有很好的特异性和重复性.应用此方法对采集的60份临床样品进行检测,其阳性检出率为92%,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80%.表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PCR检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冉多良		125	564	11.0	18.0
2	王一成	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	386	11.0	16.0
3	袁秀芳	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	65	353	11.0	15.0
4	王朝文		4	65	3.0	4.0
5	徐丽华	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	57	355	11.0	16.0
6	刘邓		7	65	3.0	7.0
10	牛登元		7	65	3.0	7.0