猪流行性腹泻病毒荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用

• 作者: 于瑞嵩 夏东 张源淑 朱于敏 李震 石明明 董世娟
• 来源期刊: 上海农业学报
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 荧光定量 PCR M基因 TaqMan
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 字数: 3913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2015.01.03

摘要

利用 DNAStar 软件对 GeneBank 中登录的猪流行性腹泻病毒（PEDV）M基因序列进行分析，选择保守区域设计合成引物和探针，制备 M基因重组质粒标准品，建立检测 PEDV 的 TaqMan 荧光定量 PCR 方法，并验证其敏感性、特异性及重复性。结果表明：建立的定量标准曲线 Ct 值和模板起始拷贝数对数在108—101 copies/μL有良好的线性关系，相关系数 R2为0.997，该方法可检测到初始模板中6.368 copies/μL 的质粒 DNA；应用该方法检测49份临床样品，阳性率达98％，比普通 RT-PCR 方法检测的阳性率高18％。研究表明，建立的 PEDV Taq-Man 荧光定量 PCR 检测方法具有较好的灵敏性、特异性和重复性，适用于临床样本中 PEDV 的快速检测，为PEDV 的感染和增殖规律的研究奠定了基础。