假单胞菌产弹性蛋白酶基因的克隆与表达

• 作者: 王东星 王红建 苗倩钦 高兆建
• 来源期刊: 徐州工程学院学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 弹性蛋白酶 基因克隆 表达 分析
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 理论研究
• 页码范围: 31-35
• 页数: 5页
• 分类号: Q556|Q786
• 字数: 3327字
• 语种: 中文

摘要

从假单胞菌(Pseudomonas sp.)XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌(Escherichia coli)中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础.以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框(ORF)克隆至融合表达载体pET30a(+)进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析.实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672 bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E.coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48 000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92 ％以上.表达蛋白具有良好活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高兆建		28	158	8.0	12.0
2	王东星		3	19	1.0	3.0
3	王红建		1	0	0.0	0.0
4	苗倩钦		1	0	0.0	0.0