双重荧光实时RT-PCR技术鉴定H9N2亚型禽流感病毒

• 作者: 单军 李燕 韩晓冬
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H9N2 双重荧光实时RT-PCR技术
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 486-490
• 页数: 5页
• 分类号: S854
• 字数: 3233字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20140418

摘要

采用双重荧光实时RT-PCR技术,建立一种简便易行的HgN2亚型禽流感病毒的快速鉴定方法.通过比对GenBank甲型禽流感病毒H9N2亚型的HA和NA基因序列,设计特异性针对HA和NA的引物,分别选用FAM和JOE两种不同荧光标记探针,构建双重实时荧光PCR一步法反应体系,同时检测样本中的HA和NA基因.结果显示:扩增曲线和特异性实验结果显示,该体系具有很好的扩增效率,且仅特异性识别H9N2亚型AIV的HA、NA基因,与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用重组质粒pMD19-T构建HA、NA阳性质粒,10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR.结果证实,本研究所建立的双重荧光定量RT-PCR体系敏感性能达到10个RNA拷贝数.采用本方法检测60份感染动物样品及60份环境样品,与传统PCR方法相比,检测敏感性提高了100倍;与病毒分离鉴定方法比较,二者的鉴定结果完全吻合.该方法具有特异性强、灵敏度高、快速易操作等优点,是H9N2亚型禽流感病毒鉴定的有效方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩晓冬	南京大学医学院	52	669	14.0	24.0
2	李燕	南京大学医学院	36	211	8.0	12.0
6	单军		11	66	5.0	8.0