钝顶螺旋藻sod基因真核表达载体的构建与表达

• 作者: 姜晓杰 李炜 王文杰 祁美荣 高金亮
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 钝顶螺旋藻 超氧化物歧化酶(SOD) 毕赤酵母 发酵 比活性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 分类号: Q554+.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.n.1004-311X.2014.05.0104-5

摘要

目的:在毕赤酵母中表达钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶SOD.方法:以质粒pET30-sod为模板,采用PCR扩增sod基因,并将其与表达载体pPIC9K相连,构建重组表达质粒pPIC9K-sod.将重组质粒pPIC9K-sod用限制性内切酶PmeⅠ线性化,并电转化入毕赤酵母GS115.利用单菌落PCR筛选整合有重组质粒的阳性转化子,用甲醇进行诱导表达,并在5L发酵罐内进行发酵表达目的蛋白.用改进的邻苯三酚自氧化法测定重组SOD的活性.结果:成功构建了钝顶螺旋藻的sod的真核表达载体,并在毕赤酵母中表达了分子量为22kDa的重组蛋白SOD.发酵罐高密度发酵所获目的蛋白的平均浓度为0.36±0.4 mg/mL,比活性为409±17U/mg.结论:在毕赤酵母中表达了分子量为22kDa的钝顶螺旋藻SOD.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王文杰		5	6	1.0	2.0
2	高金亮		4	6	1.0	2.0
3	祁美荣		12	7	1.0	2.0
4	姜晓杰		3	6	1.0	2.0
5	李炜		3	0	0.0	0.0