锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定

• 作者: 周露婷 张晔 施广霞 朱晓彤 李玲 杨瑞 章卫平 陈玉霞
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 含锌指和BTB区蛋白20 重组腺病毒 甲胎蛋白类 转录调节
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 876-880
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.05.019

摘要

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能.方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性.结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录.结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础.