法夫酵母整合型表达载体的构建

• 作者: 倪辉 朱艳冰 李利君 陈丽娜
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 法夫酵母 整合载体 构建 G418抗性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 185-191
• 页数: 7页
• 分类号: Q782
• 字数: 4800字
• 语种: 中文

摘要

为了建立法夫酵母虾青素代谢途径研究和分子育种的技术体系,构建了法夫酵母的整合型表达载体.通过测定法夫酵母对G418的抗性来确定抗性筛选物的质量浓度,以来源于法夫酵母本身的rRNA基因为基因同源重组片段,利用法夫酵母肌动蛋白启动子和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpd)启动子,构建了携带G418抗性基因的整合型载体pMD-18spakta和pMD-18spgktg.结果表明:法夫酵母对20 μg/mL质量浓度的G418敏感,将构建的载体转化法夫酵母菌株后,筛选得到了能够在含有G418的培养基上生长的转化子;利用PCR的方法检测到转化子中存在的抗性基因.将筛选得到的阳性菌株连续传代培养10次后,发现该菌株的G418抗性仍然存在;以总DNA为模板,用PCR的方法仍可检测到G418抗性基因.说明已经构建得到了遗传稳定性良好的法夫酵母整合型表达载体,构建的质粒pMD-18spakta和pMD-18spgktg可作为法夫酵母整合载体应用于法夫酵母的DNA重组实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪辉	集美大学生物工程学院	155	1014	16.0	24.0
4	陈丽娜	集美大学生物工程学院	3	1	1.0	1.0
5	朱艳冰	集美大学生物工程学院	18	30	4.0	5.0
12	李利君	集美大学生物工程学院	49	232	9.0	12.0