重组慢病毒载体介导KSHV分子开关蛋白Rta在BCBL-1细胞中的表达及其功能鉴定

• 作者: 严沁 卢春 陈菲
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 复制和转录激活蛋白 卡波氏肉瘤病毒 病毒复制
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 93-98,104
• 页数: 7页
• 分类号: R393|R373
• 字数: 4650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y130238

摘要

目的:构建含卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)分子开关蛋白,即复制和转录激活蛋白(replication and transcriptional activator,Rta)基因的重组慢病毒载体.方法:从真核表达质粒pcDNA3.1-Rta 中扩增出Rta基因,插入pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中,构建重组慢病毒载体pHAGE-Rta.将重组慢病毒骨架质粒pHAGE-Rta与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293 T细胞,通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的293 T细胞占总数的百分比.收集病毒悬液,采用梯度稀释法测定病毒滴度.以不同感染复数(MOI)的Lentivirus-Rta 病毒量感染BCBL-1细胞,72 h后检测Rta基因的表达,同时通过蛋白质印迹和病毒颗粒释放实验检测KSHV裂解期蛋白病毒白细胞介素-6(vIL-6)的表达及子代病毒颗粒的产出.结果:从真核表达质粒pcDNA3.1-Rta中扩增出Rta 基因,插入pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen后,酶切鉴定和核酸序列测定证实重组慢病毒骨架质粒pHAGE-Rta构建成功.通过慢病毒包装3质粒表达系统获得了表达Rta基因的重组慢病毒,滴度约为2×107 efu/mL.以不同MOI的重组慢病毒感染BCBL-1细胞,72 h后可检测到外源基因编码Rta蛋白的表达,且其表达能够上调KSHV vIL-6的表达水平及促进子代病毒颗粒的释放.结论:成功构建了含Rta基因的慢病毒表达载体,获得的重组病毒能够有效地感染BCBL-1细胞,并发挥激活KSHV裂解期复制的生物学功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	陈菲	南京医科大学微生物与免疫学系	3	13	1.0	3.0
3	严沁	南京医科大学微生物与免疫学系	9	19	2.0	4.0