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AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响
AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响
作者:
林炎鸿
韩俊永
黄俏佳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
Akt3
重组腺病毒表达载体
基因表达
BT474细胞
四唑盐比色测定
摘要:
目的 构建人AKT3基因的重组腺病毒表达载体,探究其对人乳腺导管癌细胞增殖的影响.方法应用RT-PCR方法从流产胎儿脑组织总RNA中扩增出AKT3 cDNA,以XhoⅠ及BglⅡ酶切位点克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体,测序鉴定后与骨架载体PAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒表达载体pAd-AKT3后,转染293A细胞,进行病毒的包装.荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光,测定病毒效价,Western印迹方法分析细胞内AKT3蛋白质的表达.通过MTT实验,研究AKT3过表达前后BT474乳腺导管癌细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误.重组腺病毒效价为2.6×108 pfu /ml,重组腺病毒转导后,BT474乳腺导管癌细胞中可检测到AKT3的过表达:Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在BT474细胞中表达良好,而转导空载体腺病毒及未转导细胞对照中未见有此融合蛋白质条带;MTT结果显示AKT3表达上调的重组腺病毒组,其增殖活性显著高于转导空载体腺病毒组及未转导细胞组,差异具有统计学意义(P﹤0.01),而后两者差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 成功地构建了AKT3重组腺病毒表达载体,AKT3过表达可增强BT474乳腺导管癌的增殖,为进一步研究AKT3的功能奠定了基础.
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文献信息
篇名
AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响
来源期刊
医学分子生物学杂志
学科
生物学
关键词
Akt3
重组腺病毒表达载体
基因表达
BT474细胞
四唑盐比色测定
年,卷(期)
2014,(1)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
12-16
页数
5页
分类号
Q78
字数
3700字
语种
中文
DOI
10.3870/j.issn.1672-8009.2014.01.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
黄俏佳
南京军区福州总医院分子医学研究中心
10
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林炎鸿
南京军区福州总医院分子医学研究中心
5
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韩俊永
南京军区福州总医院分子医学研究中心
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二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
Akt3
重组腺病毒表达载体
基因表达
BT474细胞
四唑盐比色测定
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
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相关学者/机构
期刊影响力
医学分子生物学杂志
主办单位:
华中科技大学同济医学院
出版周期:
双月刊
ISSN:
1672-8009
CN:
42-1720/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市航空路13号
邮发代号:
38-35
创刊时间:
1978
语种:
chi
出版文献量(篇)
2127
总下载数(次)
4
总被引数(次)
8829
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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