溶藻弧菌诱导马氏珠母贝血淋巴cDNA 差减文库的构建及分析

• 作者: 吴灶和 王忠良 王蓓 简纪常 陈刚 鲁义善
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马氏珠母贝 溶藻弧菌 抑制性消减杂交 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 127-135
• 分类号: Q785|S968.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.48758

摘要

为了探讨马氏珠母贝免疫防御机制,筛选免疫防御相关功能基因,以致病性溶藻弧菌人工感染的马氏珠母贝血淋巴为材料,采用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了溶藻弧菌诱导的马氏珠母贝血淋巴cDNA差减文库;以马氏珠母贝管家基因β-actin作为差减指标检测该文库的差减效率;对选取的600个阳性克隆进行测序及生物信息学分析.结果显示,该文库的差减效率可达210倍;PCR阳性检测显示差减片段为100～ 750 bp,对随机挑取600个克隆的测序结果显示,共获得414个有效EST序列;通过BLAST同源性比对,有167个EST序列(占40.34％)与NCBI数据库中已知功能蛋白质具较高同源性,其中7个EST序列(占1.69％)与免疫防御相关基因同源;此外,204个EST(占49.28％)在数据库中未发现同源序列.研究表明,SSH技术能有效富集马氏珠母贝血淋巴差异表达基因,研究结果为探索马氏珠母贝免疫基因作用机理和调控机制奠定了基础.