用环介导等温扩增技术快速检测粪便样本中的沙门菌

• 作者: 刘威 崔茜 李环 李雪莲 杨展 王思淼 赵向娜 邹大阳 黄思妹
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 沙门菌 粪便样本 invA基因 环介导等温扩增技术 快速检测
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 237-241
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|Q502
• 字数: 3583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.02.020

摘要

目的:建立快速检测粪便样本中的沙门菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并着重在灵敏度和特异性方面对此方法进行评价.方法:利用LAMP针对沙门菌特定基因invA(靶基因)设计的6条特异引物,通过引物特异性识别特定基因invA上的8个独立区域来快速检测沙门菌;LAMP反应过程中会产生白色沉淀焦磷酸镁,故可以通过监测浊度来判定反应结果.结果:实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在60～65℃等温条件下50 min内完成;如果在反应前添加羟基萘酚兰,蓝色阳性结果很明显区别于紫色阴性结果;LAMP的最低检出限为6.97 pg/μL,PCR为69.7pg/μL,LAMP方法的检测灵敏度是PCR的10倍,且具有良好的特异性.结论:LAMP方法用于快速检测沙门菌,具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果肉眼可辨、灵敏度高、特异性强的特点,对非沙门菌菌株的结果呈阴性,表明引物设计有很好的特异性.对粪便样本进行检测,发现具有同样的敏感性和特异性.这表明LAMP法是潜在的和有价值的在粪便样本中直接检测沙门菌的方法,具有快速、简便、低成本的特点.LAMP法适用于快速临床诊断.