牛浮舰蛋白-2在真核细胞中的表达与鉴定

• 作者: 孙东杰 张杰 赵峰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 浮舰蛋白-2 中国仓鼠卵巢细胞 突变体 真核表达 融合PCR
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 463-469
• 页数: 7页
• 分类号: S852.23
• 语种: 中文

摘要

采用基因重组法将牛浮舰蛋白-2 (Flotillin-2)基因的整个开放阅读框(ORF)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(一)/Myc-His(B),通过脂质体法将重组质粒转入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,利用Western-blot分析目的基因的表达情况.为确定35 ku的小蛋白来源,采用融合PCR法构建突变体,分别利用标签抗体和针对浮舰蛋白-2的抗体鉴定突变体表达蛋白的特性.测序结果表明,成功构建了Flotillin-2基因的全长ORF及其突变体mFlotillin-2的重组质粒.Western-blot结果显示,Flotillin-2基因的全长ORF在CHO细胞中表达时除出现与预期大小相一致的48 ku目的蛋白带外,还有1个35 ku的条带.基因序列分析发现,在第430～438位核苷酸存在1个似Kozak序列(CGCATGGGC).将ATG突变成GCT(丙氨酸)后,Wes-tern-blot结果显示,突变前后35 ku的小蛋白始终存在.本研究以pcDNA3.1(一)/Myc-His(B)为载体,实现了牛Flotillin-2基因的全长ORF的真核表达,证明了35 ku小蛋白并不是由于重新起始翻译导致的,而可能是浮舰蛋白-2在翻译过程中的裂解产物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张杰	中国农业科学院兰州兽医研究所	165	1879	22.0	38.0
2	赵峰	中国农业科学院兰州兽医研究所	52	383	12.0	16.0
3	孙东杰	中国农业科学院兰州兽医研究所	2	0	0.0	0.0