14-3-3γ表达载体的构建及其对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 张文文 朱雪琼 段萍 沈奇 陶雪娇
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 子宫肌瘤 载体构建 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 79-82
• 页数: 4页
• 分类号: R711.74
• 字数: 3828字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建一种稳定、高表达的14-3-3γ基因真核表达质粒载体,并探索其抗子宫肌瘤的作用.方法:提取子宫肌瘤细胞总RNA,反转录后通过RT-PCR扩增14-3-3γ,并将扩增的目的基因片段插入pCMV-N-Flag真核表达质粒,构建重组质粒14-3-3 γ-pCMV-N-Flag,重组体经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术导入子宫肌瘤细胞.应用Western Blot法检测14-3-3γ蛋白的表达,应用CCK-8检测细胞增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI双染色法经流式细胞术检测细胞凋亡.结果:①构建的14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达载体经酶切后电泳和DNA测序,显示载体构建正确;②子宫肌瘤细胞转染重组体后的14-3-3γ表达明显高于转染前(P＜0.05);③子宫肌瘤细胞转染重组体后,细胞增殖抑制率为52.90％(P＜ 0.05);④转染重组体后肌瘤细胞的凋亡率明显高于转染前(P＜0.05).结论:本研究成功构建14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达质粒载体,14-3-3γ在子宫肌瘤细胞内高表达后可抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶雪娇	温州医科大学附属第二医院妇产科	5	14	2.0	3.0
2	朱雪琼	温州医科大学附属第二医院妇产科	81	201	7.0	10.0
3	沈奇	温州医科大学附属第二医院妇产科	5	39	4.0	5.0
4	张文文	温州医科大学附属第二医院妇产科	6	11	2.0	3.0
5	段萍	温州医科大学附属第二医院妇产科	7	15	3.0	3.0