基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立

• 作者: 刘光清 孟春春 朱英奇 李传峰 李宁 梁瑞英 毕庄莉 王桂军 缪秋红 郭慧敏 陈宗艳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒 VP60 优势抗原区 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 4816字
• 语种: 中文

摘要

为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV）抗体的间接ELISA方法，首先扩增了VP60的优势抗原区A（31~250 aa）和B（470~579 aa）两个片段，然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来，克隆至pET-30a(+)，转染BL21感受态细胞，进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定，再以纯化的AB为诊断抗原，通过对抗原-抗体反应条件的多重优化，建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明，本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB），重组蛋白的分子量约为36 kDa，该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原，成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用，证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。