猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘飞 周艳君 姜一峰 杨莘 童光志 童武 郭亦非
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: SAMHD1蛋白 单克隆抗体 广谱反应性
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 921-926
• 页数: 6页
• 分类号: S852.43
• 语种: 中文

摘要

为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RT-PCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pCold-mSAMHD1.重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白.以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9.Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价.交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应.本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童光志	中国农业科学院上海兽医研究所	168	2158	24.0	40.0
2	周艳君	中国农业科学院上海兽医研究所	54	442	10.0	19.0
3	刘飞	中国农业科学院上海兽医研究所	20	166	5.0	12.0
4	童武	中国农业科学院上海兽医研究所	22	185	6.0	13.0
5	杨莘	中国农业科学院上海兽医研究所	9	12	2.0	3.0
6	姜一峰	中国农业科学院上海兽医研究所	17	136	4.0	11.0
7	郭亦非	中国农业科学院上海兽医研究所	4	3	1.0	1.0