慢病毒载体介导的APP695过表达SH-SY5Y细胞系的构建和鉴定

• 作者: 刘婷婷 刘宇 刘根 崔理立 李友 程婉雯 蔡玉洁
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: 淀粉样前体蛋白695 慢病毒载体 SH-SY5Y细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 435-438
• 页数: 4页
• 分类号: R965.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2014.04.004

摘要

目的 通过构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,用以建立可以稳定过表达APP695蛋白的SH-SY5Y-APP695细胞株.方法 利用PCR方法扩增目的基因片段APP695,并构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,鉴定后将构建好的载体与慢病毒包装系统共转染293会细胞,并以最适感染复数感染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,筛选稳转SH-SY5Y-APP695细胞株并用PCR和Westerm blot鉴定稳转株细胞APP695表达.结果 对pLVX-APP695-PGK-Puro载体进行酶切鉴定及DNA测序证明构建过表达APP695的重组慢病毒载体成功,PCR和Western blot显示构建的SH-SY5Y细胞稳转株成功.结论 成功构建APP695基因的慢病毒载体并成功构建了SH-SY5Y-APP695细胞株,该载体可在SH-SY5Y细胞株中高水平表达APP695.