重组信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段及其高亲和力突变体的表达、纯化与活性鉴定

• 作者: 刘涛 夏懋 张大鹏 彭晓芸 徐进 王皓 赵自叶 郭怀祖 钱卫珠
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: SIRPα CD47 融合蛋白 高亲和力突变体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 353-357
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

制备野生型信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段和高亲和力突变体,并进行纯化条件优化与结合活性鉴定.通过全基因合成获得SIRPα-wt和高亲和力突变体SIRPα-cv1的全基因;利用分子克隆技术将其连入表达载体,最终通过大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株表达TrX-SIRPαwt和Trx-SIRPα-cv1两种融合蛋白.通过肠激酶酶切去除融合标签以及多次层析纯化后,利用质谱技术分析目的蛋白所在组分.经SDS PAGE电泳显示,最终获得了纯度高于90％的SIRPα-wt和SIRPmcv1,与CD47结合活性结果表明两种蛋白都能与CD47 Fc融合蛋白结合.据此,本研究成功表达并纯化得到了具有配体结合活性的SIRPα-wt和其高亲和力突变体SIRPα-cv1两种重组蛋白.