细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析

• 作者: 刘强 吴璟 李红兵 杨文 林源 王志昇 王志辉 郎多勇
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球蚴 Eg95 减毒沙门氏菌 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 339-343
• 分类号: R383.33
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性.方法 将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定.将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况.将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性.BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1 ×1012 cfu/ml,100 μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况.另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010 cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周.分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清.用细粒棘球蚴IgG抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的IgG抗体滴度.于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性.结果 经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒pYA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致.重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段.安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4d后死亡.间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性IgG抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1:1 700.小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0.15,显著高于阴性对照组(1.14±0.12)和空白对照组(1.03±0.03)(P＜0.05).结论 构建了能稳定表达细粒棘球蚴Eg95蛋白的口服减毒沙门氏菌重组株,并具有良好的免疫原性和安全性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志辉	宁夏医科大学实验动物中心	9	26	3.0	4.0
2	郎多勇	宁夏医科大学实验动物中心	29	233	9.0	14.0
3	李红兵	宁夏医科大学实验动物中心	28	158	7.0	11.0
4	刘强	宁夏医科大学实验动物中心	36	153	6.0	11.0
5	王志昇	宁夏医科大学实验动物中心	16	24	3.0	4.0
6	林源	宁夏医科大学实验动物中心	18	22	3.0	4.0
7	杨文	宁夏医科大学实验动物中心	25	68	5.0	7.0
8	吴璟	宁夏医科大学实验动物中心	21	134	7.0	11.0