凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子基因的克隆及表达分析

• 作者: 何苹萍 彭敏 彭金霞 曾地刚 李咏梅 杨春玲 赵永贞 陈秀荔 韦嫔媛
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 凡纳滨对虾 酚氧化酶原激活因子(PPAF) 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) 克隆
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 页码范围: 1068-1078
• 分类号: Q785|S966
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.48989

摘要

为研究酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating factor,PPAF)在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)过程中所起的免疫作用,实验采用逆转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾PPAF基因的全长cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析了该基因在正常凡纳滨对虾和感染IHHNV凡纳滨对虾不同组织的表达情况.结果显示,克隆获得了1 986 bp凡纳滨对虾PPAF基因cDNA全长序列(GenBank登录号JQ684529),其中含有一个1 629 bp开放阅读框(ORF),两翼分别存在21 bp(5'端)和336 bp(3'端)的非翻译区.该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸,氨基酸序列269～517处存在功能结构域——丝氨酸蛋白酶结构域,氨基酸序列494～502区域存在一个ALPHA-2巨球型免疫蛋白功能位点,316 ～321区域有一个组氨酸酶活性位点;定量PCR分析发现,该基因无论在正常对虾还是感染IHHNV对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量均较低,在血液和鳃腺中的表达量明显高于其他组织,但感染IHHNV对虾不同组织中PPAF基因的表达量均低于正常对虾相应组织中的表达量.定量检测PPAF基因在对虾鳃腺组织中的表达情况显示,对虾感染IHHNV后,PPAF基因的表达量急剧降低,3h时至最低,之后表达量逐渐上升,48h时达最高值.研究表明,IHHNV可抑制PPAF基因的表达,因而抑制酚氧化酶原免疫系统的有效激活,或是其感染对虾并在对虾组织内增殖的原因之一.