猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 凌宗帅 张群 曹丙蕾 杨超然 邱洪凯
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRRSV 单克隆抗体 抗原位点 Western-blot IFA
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 1772-1776
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4282字
• 语种: 中文

摘要

采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(合6×His标签蛋白)的重组N蛋白.将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	凌宗帅		27	132	8.0	9.0
2	曹丙蕾		9	21	3.0	4.0
3	邱洪凯		2	6	1.0	2.0
4	张群		5	6	1.0	2.0
5	杨超然		1	6	1.0	1.0