鸭MAPK1蛋白的原核表达和单克隆抗体的制备

• 作者: 丁铲 于圣青 侯湾湾 曹守林 王少辉 王桂军 田明星 韩先干
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 MAPK1基因 克隆 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 页码范围: 1150-1155
• 页数: 6页
• 分类号: S852.43
• 语种: 中文

摘要

为研制鸭丝裂原活化蛋白激酶1 (MAPK1)单克隆抗体,从樱桃谷鸭脾样品扩增鸭MAPK1基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建鸭MAPK1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白,经纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠.经过3次免疫后,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选分泌抗鸭MAPK1的单克隆杂交瘤细胞株,进行3次亚克隆纯化后,制备小鼠腹水.采用间接ELISA测定腹水效价,用Western-blot检测其特异性,并进行单克隆抗体的亚类鉴定.测序结果表明,鸭MAPK1基因编码区全长1 107 bp,编码369个氨基酸.SDS-PAGE检测结果表明,本研究获得了可溶性的42 ku的鸭MAPK1重组蛋白.用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,得到2株抗鸭MAPK1的阳性杂交瘤细胞株,腹水效价均达到1∶12 800以上,均为IgG1亚类.Western-blot分析结果表明,制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应特异性.以上结果表明,本研究成功制备了抗鸭MAPK1的单克隆抗体,为进一步研究其在先天免疫反应中的作用奠定了基础.