两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株

• 作者: 冯文莉 刘昕 岑雯 马彦
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 烟曲霉 ssk1 融合PCR 基因敲除
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 255-260
• 页数: 6页
• 分类号: R329.2
• 字数: 5458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2014.04.002

摘要

目的 通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株. 方法 通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证. 结果 通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子.经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子. 结论 在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯文莉	山西医科大学第二临床医学院皮肤科	83	363	10.0	16.0
2	岑雯	山西医科大学第二临床医学院皮肤科	9	16	2.0	3.0
3	马彦	山西医科大学第二临床医学院皮肤科	35	139	6.0	11.0
4	刘昕	山西医科大学第二临床医学院皮肤科	16	28	2.0	5.0