长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用

• 作者: 贾晓东 赵帅 韩改革 韩雪琳 韩黎
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合PCR 烟曲霉 rho 1 基因回补
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-133
• 页数: 5页
• 分类号: R379.6
• 字数: 3394字
• 语种: 中文

摘要

目的 融合PCR是一种常用的构建重组片段或重组质粒的手段,但长片段融合PCR的难度较大.文中将探讨长片段融合PCR过程中引物设计及扩增条件对产物的影响.方法 以构建烟曲霉rho 1基因回补株为例,采用融合PCR的方法扩增重组片段(长达6.5 kb),在引物设计时引入不同大小的同源区,并设置不同的扩增体系.结果 当设计引物的同源区为35 bp,选用具有高扩增效率、高保真性的DNA聚合酶,以及各片段在融合PCR反应体系中的浓度为15 ng/μL时,实现了长达6.5 kb的片段扩增并完成了烟曲霉rho 1回补株的构建.结论 在合适的PCR引物设计、片段浓度配比及聚合酶条件下,长片段融合PCR在丝状真菌的基因敲除及回补株的构建中是一种非常有效的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩黎		16	85	5.0	8.0
2	韩改革	中南大学基础医学院	1	4	1.0	1.0
6	贾晓东		2	8	2.0	2.0
7	韩雪琳		3	4	1.0	2.0
8	赵帅		5	14	2.0	3.0