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摘要:
目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能.方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定.将重组载体转染MCF-7细胞,24h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2 O2诱导的细胞死亡的影响.结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确.重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡.结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡.
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文献信息
篇名 p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定
来源期刊 中国肿瘤生物治疗杂志 学科 医学
关键词 核糖体蛋白S6激酶1 基因重组 载体构建 真核表达 细胞死亡 乳腺癌 MCF-7细胞
年,卷(期) 2014,(4) 所属期刊栏目 技术方法
研究方向 页码范围 459-463
页数 分类号 R737.9|R730.54
字数 语种 中文
DOI 10.3872/j.issn.1007-385X.2014.04.018
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 赵莉 广州医科大学药学院广州蛇毒研究所 17 25 3.0 3.0
3 白晓春 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室 20 65 5.0 7.0
4 侯敬申 广州医科大学附属第二医院急诊外科 7 9 2.0 3.0
7 贾春宏 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室 4 14 2.0 3.0
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研究主题发展历程
节点文献
核糖体蛋白S6激酶1
基因重组
载体构建
真核表达
细胞死亡
乳腺癌
MCF-7细胞
研究起点
研究来源
研究分支
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国肿瘤生物治疗杂志
双月刊
1007-385X
31-1725/R
大16开
上海市杨浦区翔殷路800号
4-576
1994
chi
出版文献量(篇)
3206
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6
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