p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定

• 作者: 侯敬申 白晓春 贾春宏 赵莉
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核糖体蛋白S6激酶1 基因重组 载体构建 真核表达 细胞死亡 乳腺癌 MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 459-463
• 分类号: R737.9|R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2014.04.018

摘要

目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能.方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定.将重组载体转染MCF-7细胞,24h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2 O2诱导的细胞死亡的影响.结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确.重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡.结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵莉	广州医科大学药学院广州蛇毒研究所	17	25	3.0	3.0
3	白晓春	南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室	20	65	5.0	7.0
4	侯敬申	广州医科大学附属第二医院急诊外科	7	9	2.0	3.0
7	贾春宏	南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室	4	14	2.0	3.0