猪流行性腹泻病毒抗原捕获ELISA抗体检测方法的建立与应用

• 作者: 姜平 时晓丽 李玉峰 白娟 谈晨 赵攀登
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 抗原捕获ELISA 抗体
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 页码范围: 1262-1267
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

用猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体IgG包被酶标板,以纯化的PEDV作为捕获抗原,建立了PEDV抗原捕获ELISA抗体检测方法.优化后该方法的反应条件为:单克隆抗体包被浓度为2μg/mL,37℃包被2h加4℃过夜;含50 g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液作为封闭液,37℃封闭3h;捕获抗原的质量浓度为5 μg/mL,37℃作用3 h;被检猪血清做1∶50稀释,37℃作用1h;山羊抗猪IgG-HRP稀释度为1∶2 000,37℃作用45 min;底物最佳作用时间为37℃10 min.设定阴阳性血清抗体对照,计算血清样品的S/P值,S/P值≥0.37判为阳性,S/P值＜0.323判为阴性,介于两者之间为可疑.用建立的ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒等阳性血清,结果均无交叉反应性.该方法的批间和批内变异系数均小于10％.相对国产商品化抗体检测试剂盒,其敏感性、特异性和符合率分别为94.6％、91.3％和93.3％.应用本方法检测山东、浙江和江苏省的308份猪血清样品,结果PEDV抗体阳性率达89.29％.结果表明,建立的抗原捕获ELISA敏感性、特异性和重复性良好,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉峰		105	845	16.0	23.0
2	姜平		186	1921	25.0	35.0
3	时晓丽		10	28	3.0	5.0
4	谈晨		3	8	2.0	2.0
5	赵攀登		2	6	1.0	2.0
6	白娟		37	73	5.0	7.0