血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染

• 作者: 刘敏 尹士男 户义 李晓静 母义明 王妍
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,血管紧张素,2型 腺病毒科 人胚胎肾293A细胞 大鼠 胰岛素瘤INS-1细胞
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 927-931,935
• 页数: 6页
• 分类号: R587.1
• 字数: 4897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.12.002

摘要

目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒，并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染，构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP，并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后，AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection，MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时，AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05），同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞，但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体，并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型，为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	母义明	解放军总医院内分泌科	329	2074	22.0	31.0
2	尹士男	解放军总医院第一附属医院内分泌科	45	341	9.0	17.0
3	刘敏	解放军总医院第一附属医院内分泌科	34	286	10.0	16.0
4	王妍	军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心	19	61	5.0	6.0
5	李晓静	解放军总医院第一附属医院内分泌科	7	18	2.0	4.0
9	户义	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	4	4	1.0	2.0