锌指核酸酶(ZFN)介导的牛肌肉抑制素基因(MSTN)突变的研究

• 作者: 云亭 李荣凤 李雪玲 赵宇航
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 肌肉生成抑制素(MSTN) 转染效率 锌指核酸酶(ZFN) 突变 体细胞核移植
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1204-1212
• 页数: 9页
• 字数: 7050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.10.003

摘要

肌肉生成抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉发育的负调控基因,突变后会引起肌肉的过度发育,在肉用动物育种中有非常重要的价值.本研究利用锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)对牛(Bos taurus)MSTN基因的第二外显子特异性剪切,诱导该基因的突变,从而达到敲除该基因的目的.首先对脂质体介导的双质粒共转染牛成纤维细胞的条件进行优化,获得的共转染效率高达19.27％;之后利用两组ZFNs对牛成纤维细胞进行转染,单细胞通过口吸法移入96孔板,经扩大培养后进行PCR筛选,获得18株MSTN基因突变细胞株,其中包括一株双等位基因敲除的细胞系,两组ZFNs对牛成纤维细胞的突变效率分别为6.05％和3.84％;最后,挑选一株突变细胞系进行体细胞核移植研究,共获得24枚重构胚;将去除透明带的重构胚培养于2i培养液中,获得囊胚来源的类滋养层干细胞,通过PCR和测序检测,证明该细胞系在MSTN基因第二外显子具有与供体细胞相同的突变.结果表明,所合成的两组ZFNs可以在MSTN作用位点引起突变,具有很高的突变效率,而且能获得双等位基因突变的细胞株,获得的细胞株能够用作体细胞核移植的供体细胞.本研究为肉用牛的品质改良和育种工作提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李雪玲	内蒙古大学教育部哺乳动物生殖生物学及生物技术重点实验室	13	24	3.0	4.0
2	李荣凤		10	2	1.0	1.0
3	赵宇航	内蒙古大学教育部哺乳动物生殖生物学及生物技术重点实验室	7	23	2.0	4.0
4	云亭	内蒙古大学教育部哺乳动物生殖生物学及生物技术重点实验室	2	5	2.0	2.0