靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证

• 作者: 严国勇 任刚 张婷婷 张存芳 张智英 王令 王瑞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 锌指核酸酶 MSTN基因 腺病毒 基因敲除
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1192-1199
• 分类号: S826|S813.3
• 字数: 6199字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除.本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack -CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy -1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL -T2A-ZFNR表达载体.然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度.侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性.结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因.本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王瑞	西北农林科技大学动物科技学院	37	146	7.0	10.0
2	张智英	西北农林科技大学动物科技学院	28	36	4.0	4.0
3	张婷婷	西北农林科技大学动物科技学院	21	144	6.0	11.0
4	任刚	西北农林科技大学动物科技学院	4	10	2.0	3.0
5	王令	西北农林科技大学动物科技学院	6	10	2.0	3.0
6	张存芳	西北农林科技大学动物科技学院	2	6	1.0	2.0
7	严国勇	西北农林科技大学动物科技学院	1	6	1.0	1.0