转基因小麦外源基因插入位点初步分析及检测方法的建立

• 作者: 刘志勇 梁荣奇 段晓亮 许兰杰
• 来源期刊: 粮油食品科技
• 学科: 农学
• 关键词: sGNA 转基因小麦 插入位点 边界序列 检测方法
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 76-81
• 页数: 6页
• 分类号: S512.1
• 字数: 5228字
• 语种: 中文

摘要

利用染色体步移（genome -walking）原理和巢式 PCR 方法，对转基因小麦外源基因 sGNA 插入位点的序列特征进行了分析，并以此建立了 sGNA 基因转化事件特异性检测的方法。根据 sGNA 基因的核苷酸序列设计特异引物，利用 Takara 公司提供的简并随机引物，通过染色体步移法扩增到了转sGNA 基因株系 zy2-18的插入位点的边界序列，分析得到的边界序列可知，外源基因片段是通过部分同源重组的方式与小麦基因组进行整合的，整合位点位于 A 染色体组。检测结果显示携带外源基因 sGNA 的质粒在与小麦基因组整合的过程中发生了剪切，且 Ubi 启动子与 bar 基因被切除，保留了两个串联的 NOS 基因，且在4500～4520 bp 区间发生了重组后的缺失，而在4786～4810 bp 区间有一段碱基序列插入，导致插入区段的小麦基因组序列发生重排，初步分析外源基因是通过同源重组的方式进行整合的。通过验证，证明了插入位点信息的准确性，并初步判断插入位点位于小麦 A 染色体组。因此，随机引物法 genome -walking 可以作为转基因小麦安全检测及身份识别的有效方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁荣奇	中国农业大学农学与生物技术学院	20	1092	15.0	20.0
2	刘志勇	中国农业大学农学与生物技术学院	14	378	8.0	14.0
3	段晓亮	中国农业大学农学与生物技术学院	13	44	4.0	6.0
7	许兰杰	中国农业大学农学与生物技术学院	2	5	2.0	2.0