超高效液相色谱法同时测定柑橘中主要酚酸和类黄酮物质

• 作者: 张耀海 焦必宁 赵其阳 郑洁
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 超高效液相色谱 柑橘 同时测定 酚酸 类黄酮
• 年，卷（期）: 2014,（23）
• 所属期刊栏目: 贮藏?保鲜?加工
• 页码范围: 4676-4687
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.23.015

摘要

【目的】建立超高效液相色谱快速、同时测定柑橘中主要酚酸和类黄酮组成及含量的方法，为柑橘中酚类物质的开发提供技术支撑。【方法】首先对上机条件优化，检测波长选择基于全扫描（190—400 nm），选择所有物质都有最大吸收光谱的波长；柱温、流动相类型和流速优化参考相关文献，为了能使基线分离，采用梯度洗脱方式；再从提取剂类型、提取次数和时间进行单因素比较试验，对柑橘样品处理方法进行优化；柑橘样品经乙酸乙酯振荡提取30 min，果皮和果肉分别提取4次和3次，蒸发浓缩，甲醇定容上机进行测定。【结果】以ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7μm）为分离柱，柱温为35℃，进样量为3.0μL，流速为0.3 mL·min-1；梯度洗脱，以0.3%乙酸水溶液（A）/甲醇（B）为流动相：95%—80%（0—3 min）A，80%—80%（3—8 min）A，80%—70%（8—12 min）A，70%—20%（12—17 min）A，20%—95%（17—20 min）A；定量波长为283 nm。19种物质在18 min内基线分离，线性范围为0.01—500 mg·L-1，线性相关系数均大于0.999，精密度、重复性和稳定性良好（相对标准偏差小于5%）。两个水平下加标，果皮回收率为85.8%—109.4%（相对标准偏差为0.86%—6.06%），果肉回收率为88.4%—112.7%（相对标准偏差为1.05%—5.23%），方法检出限为0.001—0.09 mg·kg-1（S/N=3）。采用此方法对实际样品进行检测，样品包括5大类柑橘：宽皮柑橘类（沙糖橘和椪柑）、甜橙类（纽荷尔脐橙）、柚类葡萄柚类（鸡尾葡萄柚）、枸橼柠檬类（柠檬）和金柑类。不同品种类黄酮和酚酸物质含量和种类差异较大，就总酚类物质而言，椪柑和鸡尾葡萄柚果皮中最高，椪柑是金柑的5倍，是其他品种的1—1.5倍，果皮为果肉的3—5倍；就类黄酮物质而言，鸡尾葡萄柚果皮中总含量最高（1813.22 mg·kg-1），其次是椪柑、纽荷尔脐橙、沙糖橘、柠檬、金柑，果肉总含量变化趋势与果皮一致，果皮明显高于果肉；黄烷酮（圣枸橼苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮甙、香蜂草甙、柚皮芸香甙、柚皮素和橙皮素）是柑橘中主要的类黄酮，鸡尾葡萄柚果皮中最多（1491.8 mg·kg-1），其次是柠檬和纽荷尔脐橙，最少的是金柑，而果肉含量明显低于果皮；就酚酸而言，沙糖橘果皮中最多（515.21 mg·kg-1），其次是椪柑、柠檬、鸡尾葡萄柚和纽荷尔脐橙，金柑最少，果肉中变化趋势与果皮一致，果皮含量为果肉的3—5倍；绿原酸，阿魏酸是主要的酚酸。【结论】利用超高效液相色谱仪，建立了同时快速检测柑橘中主要酚酸和类黄酮物质的方法。该方法高效、精确、低耗、环保，并经实际样品（5大类柑橘）验证，表明该方法可作为柑橘中酚酸和类黄酮同时、快速检测的常规分析方法。