漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用

• 作者: 冯娟 李荷 覃炎锋
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 漆酶 大肠杆菌 表达条件优化 染料降解
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1076-1081
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|X172
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.06004

摘要

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/pET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95％以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/pET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯娟		11	104	5.0	10.0
2	李荷		27	182	7.0	12.0
3	覃炎锋		2	1	1.0	1.0