靶向脑心肌炎病毒VP1基因的shRNA对脑心肌炎病毒复制的抑制作用

• 作者: 冯若飞 张海霞 张蕾 李向茸 王永录 马忠仁
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 脑心肌炎病毒 RNA干扰 shRNA VP1基因
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 551-557
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

选择脑心肌炎病毒(EMCV) VP1基因,探讨了shRNA对EMCV复制的影响.设计合成4对编码siRNA的VP1基因的DNA序列,分别构建pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR干扰载体X109-1、X109-2、X109-3和X109-4,脂质体介导转染至BHK21细胞,接种EMCV.病毒TCID50和实时荧光定量PCR结果表明,4种重组EMCV VP1 shRNA对EMCV的复制均有抑制作用,其中X109-2的抑制作用最显著.X109-2转染BHK21细胞后分别接种EMCV、口蹄疫病毒(FMDV)、乙型脑炎病毒(JEV),EMCV的lgTCID50为3.5,FMDV和JEV的lgTCID50均在7.0以上,说明重组shRNA质粒对EMCV复制的抑制具有明确的特异性和干扰的靶向性.X109-2和pEGFP-VP1真核表达载体共转染CHO-K1细胞后,RT-PCR和Western-blot检测结果表明,VP1 shRNA可抑制pEGFP-VP1在细胞中的蛋白表达,进一步证明了干扰载体的靶向性.上述结果为进一步研究EMCV的感染和复制机制奠定了基础.