分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

• 作者: 付洁 刘强 华玲 宋海峰 张小爱 张晶 杨小盼 高新
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母 人全长抗体 N-糖基化改造 抗体库 分泌表达
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 58-62
• 分类号: R392.11|Q949.326.1
• 语种: 中文

摘要

目的 基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库.方法 基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZoαA-CH-CL,经基因序列分析和Western blot分析验证.设计44对简并引物经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增获得轻链可变区VL和重链可变区VH基因库.通过PCR将其插入上述恒定区表达载体构建全长抗体表达库pPICZαA-VH-CH-VL-CL.将该库电转化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y.随机挑取20个平板克隆进行菌液PCR鉴定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt数据库鉴定抗体库正确性与多样性.结果 获得表达重链和轻链恒定区的表达载体pPICZαA-CH-CL,并在此基础上初步获得全长抗体表达库pPICZαA-VH-CH-VL-CL,库容量为105.结论 成功构建了分泌型N-糖基化毕赤酵母人全长抗体库.