用于慢病毒包装的高纯度质粒DNA的大量制备和应用

• 作者: 何涛 方红 杨文理
• 来源期刊: 泸州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 质粒DNA 制备 酶切 转染 慢病毒包装
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 257-260
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 字数: 2594字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2669.2014.03.006

摘要

目的:建立简便易行、成本低廉和安全可靠的高纯度质粒大量制备方法,探讨其在分子生物学研究中的应用.方法:培养含目的质粒的菌株,运用改良后的碱裂解法大量提取质粒DNA并进行纯化,微量核酸仪测定质粒DNA的产量及纯度;采用琼脂糖凝胶电泳、限制性核酸内切酶酶切、转染哺乳动物细胞和慢病毒包装,鉴定质粒DNA的质量及转染效率.结果:本质粒提取方法获得质粒DNA产量为2.5 mg/L菌液,OD260/OD280=1.91;以超螺旋质粒DNA为主;限制性核酸内切酶可完全酶切;哺乳动物细胞转染效率在85％以上;可用于慢病毒包装.结论:本方法抽提质粒DNA操作简单、经济实用,可替代质粒大量提取试剂盒获得高产优质的质粒DNA,充分满足了分子生物学实验的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何涛	泸州医学院转化医学中心	112	491	13.0	18.0
2	杨文理	泸州医学院基础医学院生物化学教研室	12	30	3.0	4.0
3	方红	泸州医学院肿瘤医学研究所	1	2	1.0	1.0