施马伦贝格病焦磷酸测序检测方法的建立

• 作者: 冯春燕 吕继洲 吴绍强 张永宁 林祥梅 王彩霞 袁向芬 邓俊花
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 施马伦贝格病毒 聚合酶链反应 焦磷酸测序 鉴定 检测
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 试 验 研 究
• 页码范围: 57-61,65
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5|S858.23
• 字数: 4433字
• 语种: 中文

摘要

为适应口岸施马伦贝格病快速、准确、高通量检测需求，建立一种基于RT-PCR及焦磷酸测序技术平台的施马伦贝格病检测方法。本研究针对施马伦贝格病毒基因组RNA的S、M和L三个基因节段保守区域利用焦磷酸测序软件PyroMark Q96ID分别设计RT-PCR扩增引物及焦磷酸测序引物，以人工合成的SBV重组质粒为模板分别建立了SBV S、M、L基因的PCR-焦磷酸测序检测方法，比较三基因的PCR扩增结果以及测序分析结果，结合特异性检测结果，最终确定以M基因作为靶基因建立的焦磷酸测序检测方法效果最好，并以德国FLI提供的SBV（BH80株）RNA对所建立的方法进行验证，通过对测得序列的比对分析可确定为施马伦贝格病毒，这表明本研究所建立的方法灵敏度高、稳定性好、特异性强，可以用于施马伦贝格病毒基因序列水平上的精准检测鉴定。