肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 周围 宋婷 岳俊杰 廖翔 戴红梅 梁龙 王玉瑞 王羽 陈欣欣
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 NleB1 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 799-802
• 页数: 4页
• 分类号: R378.21
• 字数: 3446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.10.013

摘要

目的：构建肠出血性大肠杆菌（ EHEC） O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列，构建原核表达载体pET24a-nleB1，将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，利用异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白His-NleB1表达，并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化，以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠，获得抗血清。 Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体，纯化得到融合蛋白His-NleB1，进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体，为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。