小鼠PD-L1胞外段基因的原核表达及活性分析

• 作者: 于才勇 刘芳芳 卞干兰 王键 薛茜 郭虹敏 陈琨 雷占翔 鞠躬
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠PD-L1胞外段 融合蛋白 原核表达 抑制性信号
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1047-1050
• 分类号: Q934.3|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达小鼠程序性死亡分子1配体胞外段(exPD-L1)蛋白基因并在体外初步验证其生物学活性.方法 应用小鼠脾脏细胞总RNA,反转录PCR克隆exPD-L1基因序列,将其克隆到pGEX-4T-1载体中构建原核表达载体pGEX-4T-1-exPD-L1,经酶切和测序鉴定正确后,转化到E.coli BL21(D3)中,经IPTG诱导表达后,对包涵体蛋白进行复性和纯化.对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot法检测证明其正确后,采用GST pull-down检测融合蛋白和PD-1的相互作用,鉴定其生物学活性.结果 成功构建重组质粒pGEX-4T-1-exPD-L1,并在宿主菌中成功表达相对分子质量(Mr)55 000的重组蛋白,包涵体成功复性和纯化后经Western blot法证明其正确表达,同程序性死亡分子1(PD-1)蛋白的GST pull-down结果表明融合蛋白具有生物学活性.结论 成功克隆和表达小鼠exPD-L1蛋白,并证明其具有生物学活性.