活体电穿孔法辅助核酸免疫制备小鼠抗棉铃虫精氨酸激酶的抗体

• 作者: 刘小宁 张富春 朱燕 赵文博 赵洁 马纪 黄丽娜
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 棉铃虫 精氨酸激酶 电脉冲导入法 抗体
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 1054-1057
• 分类号: R392.11|R392-33|R446.61
• 语种: 中文

摘要

目的 利用活体电穿孔法将携带有棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK)基因的表达质粒导人昆明小白鼠制备抗体.方法 在构建重组质粒pcDNA3-HarmAK并测序验证序列的正确性后,利用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法将重组质粒pcDNA3-HarmAK导入到小鼠体内,免疫5次后,用ELISA检测确定抗体的效价,并对抗体的特异性进行Western blot法检测.结果 小鼠抗HatmAK血清的效价达到1∶40 000,Western blot法检测的结果显示此抗血清能与融合蛋白His-HarmAK和棉铃虫总蛋白中的AK蛋白特异性结合.结论 采用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法制备了高滴度和特异性的小鼠抗HarmAK的抗体.