小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测

• 作者: 姜玉梅 尹钧 曹玲珑 李冬兵 熊大斌 牛洪斌 邓利
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 硫氧还蛋白 酵母双杂 诱饵载体 自激活
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 作物栽培·遗传育种
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 分类号: S512.1
• 字数: 2454字
• 语种: 中文

摘要

为构建小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用.利用RT-PCR扩增Ta Trx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用.结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用.因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trx-h蛋白相互作用的蛋白.