艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化

• 作者: 刘文恩 李艳华 简子娟 罗姗 钟一鸣 陈伟
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 关键词: 艰难梭菌 毒素B 异丙基-β-D巯基半乳糖苷 诱导表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 725-728,731
• 页数: 5页
• 字数: 4916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2014.06.003

摘要

目的：优化艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件，在获得高表达融合蛋白后对其进行纯化，为艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3单克隆抗体的制备奠定基础。方法以诱导前菌液600 nm处的光密度值（OD600）、诱导温度、诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导时间为单变量，分别诱导融合蛋白的表达，在此基础上采用正交试验对融合蛋白的诱导表达条件进行优化，通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量分析融合蛋白的表达量及表达形式，以Western blot对融合蛋白进行鉴定，以GST 亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果融合蛋白诱导表达的最佳条件为诱导前菌液OD6000．8、IPTG浓度0．6 mmol/L、诱导时间12 h、诱导温度30℃，融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主，经纯化后，融合蛋白纯度超过90％。结论本研究成功优化了艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白的诱导表达条件，获得大量表达，并成功对其进行了纯化，为后续单克隆抗体的制备奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘文恩	中南大学湘雅医院检验科	181	1758	20.0	33.0
2	陈伟	中南大学湘雅医院检验科	149	828	15.0	20.0
3	简子娟	中南大学湘雅医院检验科	29	237	9.0	13.0
4	李艳华	中南大学湘雅医院检验科	32	200	8.0	12.0
5	钟一鸣	中南大学湘雅医院检验科	21	136	7.0	10.0
6	罗姗	中南大学湘雅医院检验科	1	5	1.0	1.0