艰难梭菌毒素C蛋白的克隆表达和抗体制备

• 作者: 冯晓燕 张贺秋 杨锡琴 王宏伟 王建霞 罗芸 金大智 黄忱
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 艰难梭菌 毒素C蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 760-765
• 页数: 6页
• 分类号: R967
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2017.07.009

摘要

目的 克隆艰难梭菌毒素C(tcdC)基因并构建TcdC蛋白的原核表达载体,制备多克隆抗体.方法从艰难梭菌标准株(ATCC43255)基因组DNA中扩增获得tcdC基因的部分片段,连接到原核表达载体并转化到大肠杆菌中,诱导表达GST-TcdC/L和IL1-TcdC/L融合蛋白,前者用作免疫抗原,后者用作检测抗原.采用SDS-PAGE法鉴定融合蛋白的表达,并通过Ni柱纯化IL1-TcdC/L融合蛋白,Q柱纯化GST-TcdC/L融合蛋白.将纯化的GST-TcdC/L融合蛋白于兔背部皮内多点注射,每只1 mg,4周1次,共3次.最后1次免疫后2周,采血分离血清.用IL1-TcdC/L蛋白包被酶联板,采用ELISA法检测多抗血清效价;Western蛋白印迹法检测多抗特异性.结果SDS-PAGE结果表明,所表达的2个融合蛋白与预期分子质量一致.ELISA结果显示,制备的TcdC多克隆抗体效价>1:6.4×104.Western蛋白印迹实验显示,制备的TcdC/L多克隆抗体能特异性识别艰难梭菌中的TcdC蛋白.结论成功克隆了艰难梭菌tcdC/L基因并进行了原核表达,成功制备了其多克隆抗体,为后续研究tcdC基因在艰难梭菌致病过程中的作用及机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗芸		56	262	10.0	12.0
2	冯晓燕	军事医学科学院基础医学研究所	36	130	6.0	10.0
3	王宏伟	河北大学生命科学学院	58	430	14.0	18.0
4	金大智		25	68	5.0	6.0
5	杨锡琴	军事医学科学院基础医学研究所	8	7	1.0	2.0
6	黄忱		6	7	1.0	2.0
7	王建霞	河北大学生命科学学院	5	12	1.0	3.0