SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析

• 作者: 丁细霞 丘立文 余志武 余楠 潘玉先 车小燕 郝卫 黄莉
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 严重急性呼吸综合征( SARS) SARS冠状病毒( SARS-CoV) 核衣壳蛋白 杆状病毒 抗原反应性
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 721-725
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.06.001

摘要

目的：SARS冠状病毒（ SARS-CoV）核衣壳蛋白（ N蛋白）在杆状病毒-昆虫系统的表达，研究其抗原性。方法：利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因，使用BamHⅠ和Sal Ⅰ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体，构建重组质粒转化DH10 Bac细胞，获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞，在High Five细胞中表达SARS-NP；表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果：成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒，并在High Five细胞高效表达，获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证，重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗（8E1A17）和兔免疫血清识别，能与SARS患者血清反应，与健康人血清、人冠状病毒229 E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应，具良好抗原反应性。结论：SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统，具较强抗原反应性，初步认为其与229 E型和OC43型感染血清无交叉反应性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丘立文	南方医科大学珠江医院检验医学部	23	101	6.0	7.0
2	车小燕	南方医科大学珠江医院检验医学部	49	197	8.0	9.0
3	郝卫	南方医科大学珠江医院检验医学部	11	34	3.0	5.0
4	潘玉先	南方医科大学珠江医院检验医学部	12	36	4.0	5.0
5	丁细霞	南方医科大学珠江医院检验医学部	14	45	4.0	6.0
6	黄莉	南方医科大学珠江医院检验医学部	14	27	3.0	3.0
7	余志武	南方医科大学珠江医院检验医学部	2	5	2.0	2.0