PRPS2基因shRNA质粒的构建与表达

• 作者: Yang Yong 吴彬 李钰 游锦梅 陈显久
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 磷酸核糖焦磷酸合成酶2/PRPS2 RNA干扰 HCT116细胞 基因重组
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 678-682,783
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2014.08.003

摘要

目的 构建磷酸核糖焦磷酸合成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA质粒,为探讨PRPS2基因功能奠定基础. 方法 设计并合成PRPS2基因shRNA,将其分别与真核表达载体GV102重组为shRNA质粒,分别命名为GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分别转染这三种载体的细胞设为实验组1、2、3;阴性对照载体命名为GV102-PRPS2-0,转染该载体设为阴性对照组;分别测序鉴定.常规转染人结肠癌HCT116细胞后采用RT-PCR、Western blot检测细胞PRPS2基因的表达水平,筛选干扰效果最佳shRNA载体. 结果 设计并合成的PRPS2干扰载体,经测序鉴定序列正确.转染HCT116细胞后在72 h内发绿色荧光的细胞数量随时间的增加而增强,转染效率均介于40％-50％.RT-PCR和Western blot结果显示,转染shRNA质粒的3个实验组PRPS2表达均较阴性对照组显著下降(P＜0.05),其中GV102-PRPS2-3使细胞中PRPS2的mRNA(0.27 ±0.05)水平下降73％、蛋白(0.30 ±0.04)水平下降70％,干扰效果优于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05). 结论 本研究利用RNAi技术下调了人结肠癌HCT116细胞中PRPS2基因的表达,为深入探讨PRPS2表达下调后对细胞行为的影响奠定了研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈显久	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	117	434	11.0	16.0
2	李钰	山西医科大学第一临床医学院骨科	13	35	3.0	5.0
3	游锦梅	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	11	19	3.0	3.0
4	吴彬	太原钢铁(集团)有限公司总医院中心实验室	6	11	2.0	3.0