徐淮山羊Sox2基因启动子的克隆及其活性的初步分析

• 作者: 刘志永 张亚妮 张振韬 曹文广 朱睿 李碧春 邱峰龙 陈庭锋 韦光辉
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: Sox2基因 启动子 活性分析 5-aza-2′-deoxycytidine诱导 山羊
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 5-10
• 页数: 6页
• 分类号: S827.2
• 字数: 3794字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在确定徐淮山羊Sox2基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨Sox2基因的表达调控机制.根据GenBank已公布的绵羊Sox2基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增Sox2基因的一系列启动子缺失片段,经酶切、测序及生物信息学分析,构建包含Sox2基因5′侧翼区一系列启动子缺失片段的pGL3-Sox2双荧光素酶表达载体,转染COS-7和GC1细胞,并进行5-aza--2′-deoxycytidine诱导,检测不同片段的启动子活性.结果表明:徐淮山羊Sox2基因5′侧翼区-1249-+49 bp区域的启动子活性最强(COS-7细胞),-1792-+49 bp区域活性最强(GC1细胞),-224-+49 bp区域为Sox2基因启动子基本活性区域.进一步研究发现,-484--109 bp区域存在正调控元件,-755--484 bp区域存在负调控元件.本实验通过构建包含Sox2基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了Sox2基因启动子的核心区域.另外,5-aza-2′-deoxycytidine可以显著增强Sox2启动子的活性.为进一步研究Sox2基因的表达调控机制奠定了基础.