抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因的克隆与鉴定

• 作者: 丁天兵 寇甜甜 雷迎峰
• 来源期刊: 中国医师杂志
• 关键词: 脑炎病毒,日本 抗体,单克隆 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 577-580
• 页数: 4页
• 字数: 3045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2014.05.001

摘要

目的 克隆抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区(VH)基因.方法 从分泌抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增重链可变区基因.凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,挑取菌落PCR鉴定后测序并进行分析.测序正确的质粒经EcoRI和XhoI酶切、纯化后的产物和原核表达载体pRSET A在SolutionI作用下连接,转化BL21(DE3)对重组质粒进行表达.经Tricine-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重链可变区表达产物的表达水平,用ELISA检测表达产物能否与日本脑炎病毒结合.结果 确定了2F2VH基因序列,长度为354 bp,编码118个氨基酸,第22位和第96位残基是维持抗体结构的半胱氨酸,含有特异性CDR1、CDR2和CDR3区域,符合鼠源性免疫球蛋白基因的特征.ELISA检测结果显示原核表达的2F2重链可变区产物可与日本脑炎病毒特异性结合.结论 获得了抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷迎峰	第四军医大学基础部微生物学教研室	60	194	7.0	10.0
2	丁天兵	第四军医大学基础部微生物学教研室	32	161	7.0	11.0
3	寇甜甜	第四军医大学基础部微生物学教研室	4	14	2.0	3.0