蛋白激酶C受体1过表达载体、干扰载体的构建及鉴定

• 作者: 张丽 张望龙 毛小琴 牛华 贾雄飞 郑瑞
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白激酶C受体1 过表达载体 干扰载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 分类号: Q291
• 字数: 2871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2014.14.004

摘要

目的：构建并鉴定蛋白激酶C受体1（ RACK1）过表达及干扰真核表达载体。方法采用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）从人肝癌细胞系Huh-7．5．1中扩增RACK1全长cDNA系列，用巢式PCR扩增对应的CDS，并将其克隆到PIRES2-EGFP，PCR鉴定后进行测序分析。以人RACK1基因为靶基因，设计合成两对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列，退火后与酶切后的载体RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen进行连接，并行酶切分析和测序鉴定。将构建好的过表达载体和干扰载体用脂质体转染HUVEC细胞系。结果两对引物PCR扩增的序列大小与预期结果一致，PIRES2-EGFP/RACK1载体954个碱基成功插入到预计位点，序列完全一致。 RNA干扰载体pRetroQ/RACK1-1、pRetroQ/RACK1-2和pRetroQ/HK插入序列均与预计相符。荧光显微镜观察，转染的HUVEC细胞均表达EGFP和GFP。结论成功构建RACK1过表达载体及其RNA干扰载体，并可被成功导入HU-VEC细胞系。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛华		22	108	6.0	9.0
2	张丽		22	159	7.0	12.0
3	贾雄飞		10	14	2.0	3.0
4	毛小琴		17	94	5.0	9.0
5	郑瑞		9	24	2.0	4.0
6	张望龙		1	2	1.0	1.0